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隨著點(diǎn)成微生物細(xì)胞計(jì)數(shù)儀 QUANTOM Tx™的推出，基于單細(xì)胞水平的細(xì)菌計(jì)數(shù)方法正在逐步取代傳統(tǒng)、耗時(shí)的 CFU/ml 測定。該儀器利用細(xì)胞膜通透性，借助熒光染料對細(xì)菌核酸進(jìn)行染色，可在幾分鐘內(nèi)快速完成準(zhǔn)確計(jì)數(shù)。
在微生物培養(yǎng)過程中，需根據(jù)菌種特性、生長條件及研究目標(biāo)選擇合適的培養(yǎng)基。盡管常規(guī)培養(yǎng)基本身不具備自發(fā)熒光特性，但其成分可能與熒光染料發(fā)生相互作用，進(jìn)而導(dǎo)致背景熒光增強(qiáng)，影響信號判讀。因此，建議實(shí)驗(yàn)前將培養(yǎng)基（如添加了點(diǎn)成 QUANTOM™ 總細(xì)胞染色液）與熒光染料混合，評估背景噪聲水平差異，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件。
本研究所測試培養(yǎng)基包括：營養(yǎng)肉湯（NB）、魯里亞-貝爾塔尼（LB）肉湯、無羊血的大豆肉湯（TSB）、含羊血的大豆肉湯（TSB-SB）、酵母提取物蛋白胨葡萄糖（YPD）培養(yǎng)基、de Man-Rogosa-Sharpe（MRS）培養(yǎng)基。
未添加點(diǎn)成QUANTOM™總細(xì)胞染色液時(shí)，各培養(yǎng)基均未檢測到自發(fā)熒光背景信號。添加染色液后所有培養(yǎng)基均出現(xiàn)背景信號增強(qiáng)現(xiàn)象，其中MRS培養(yǎng)基背景噪聲顯著。建議實(shí)驗(yàn)操作時(shí)避免將熒光染料直接與培養(yǎng)基混合，而應(yīng)使用PBS緩沖液稀釋培養(yǎng)細(xì)胞，以消除背景熒光干擾。
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